Extracción del ARN del VIH en la optimización de la técnica de PCR reversa para la detección del VIH en plasma de pacientes infectados

 

Fig 1. RT-PCR (PCR retrotranscriptasa). Disponible en: https://www.ucm.es/data/cont/docs/261-2019-03-22-pr%C3%A1ctica%204_DISE%C3%91O%20EXPERIMENTAL%20Y%20AN%C3%81LISIS%20DE%20DATOS%20EN%20LA%20T%C3%89CNICA%20DE%20LA%20RT%20qPCR%20%281%29.pdf

Extracción del ARN:
1. Toma de muestras de sangre venosa usando EDTA al 10% en un volumen de 5 mL como anticoagulante (1).
2. Obtención de plasma por centrifugación entre 800 y 1.600 g durante 20 minutos a temperatura ambiente (1).
3. Proceso de extracción de ARN viral mediante micro-columnas de sílica-gel (1).

Tipo de PCR: RT-PCR (retrotranscriptasa PCR)
Pasos:
1. El material genómico extraído fue sometido a una transcripción reversa (1).
2. Detección de la presencia o no de ADN viral mediante la técnica de PCR a través de un ensayo a dos rondas (1).
3. En ambas rondas, la amplificación se realizó de la siguiente manera (1):
3.1. Desnaturalización: tiempo de 30 s a 95°C (1).
3.2. Alineamiento: tiempo de 30 s a 55°C (1).
3.3. Extensión: tiempo de 60 s a 72°C (1).
4. Se realizó 35 ciclos y un ciclo de desnaturalización final de 2 min a 95°C (1).
5. La amplificación se completo con una extensión final de 7 min a 72°C (1).

Referencias Bibliográficas:
1. Ameli GL, Gutiérrez CR, D'Angelo PR, Rangel HC. Optimización de la técnica de PCR reversa para la detección del VIH en plasma de pacientes infectados. Rev. Soc. Ven. Microbiol [Internet]. 2015 [ citado 10 Jul 2022]; 33(2):157-161. Disponible en: http://ve.scielo.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1315-25562013000200013